THERMONUCLÉASE GÉLOSE

Fiche technique #1669 / 2010.07.22

La gélose Thermonucléase est un milieu solide utilisé pour l'identification de la nucléase thermorésistante  produite par la plupart des Staphylococus aureus, Staphylococcus schleiferi, Staphylococcus intermedius et Staphylococcus hyicus.

 

FORMULE

en grammes par litre d'eau purifiée filtrée

 

Tampon Tris (pH 9,0) 0,05M ......................1000 ml

Acide désoxyribonucléique DNA .....................0,3 g

Chlorure de calcium .....................................0,0011

Chlorure de sodium ..........................................10,0

Gélose ..............................................................10,0

pH 9,0 +/- 0,2 à 25º C

Cette formule approximative peut être ajustée et/ou enrichie pour  des résultats optimaux.

PRÉCAUTIONS

Ce milieu est pour usage  diagnostique IN VITRO exclusivement.


CONSERVATION

Entreposer à l'abri de la lumière, entre 2-8˚ C

DÉTÉRIORATION

Rejeter un milieu préparé présentant des signes de contamination ou de déshydratation. Ne pas utiliser un milieu, dont la date de péremption est dépassée. Ne pas utiliser un milieu déshydraté pris en masse ou  croûté

TECHNIQUE

Amener le milieu préparé à la température de la pièce avant d'ensemencer.

1)     Ensemencer un bouillon BHI avec 2-3 colnies à tester.

2)     Incuber à 35˚ C pendant 24 heures.

3)     Faire bouillir le bouillon BHI  pendant 15 minutes et  refroidir  à la température de  la pièce.

4)     Creuser des puits sur la  surface de la gélose avec une  pipette Pasteur stérile. Ne  pas dépasser 12 puits qui  correspondront à 12 bactéries différentes devant être testées.

5)     Remplir un des puits avec  2  gouttes du bouillon BHI inactivé.

6)     Incuber à 35 ˚ C pendant  1-4  heures, le couvercle du  Pétri au dessus. Réincuber un résultat négatif pour encore 20 heures.

Remarque: si une hémoculture  positive doit être testée, faire bouillir le bouillon contenant le sang pour 15 minutes.


CONTRÔLE DE QUALITÉ 
Résultats après 4-24 hrs à 35ºC 

Organismes

ATCC

Zone claire

Anneau
Staphylococcus aureus

25923

+ rose

+
Staphylococcus aureus MRSA

clinique

+

+
Staphylococcus epidermidis

12228

-

-
Staphylococcus epidermidis

clinique

-

-

INTERPRÉTATION

Un test positif est caractérisé par une zone claire rosée ou non, autour du puit, ainsi que d'un anneau bleu foncé autour de la zone claire.


LIMITES DE LA MÉTHODE

Ce milieu permet une identification partielle. D'autres tests peuvent être requis.

RÉFÉRENCES

  1. Balows, A., W.J. Hausler Jr., K. L. Herrmann, H. D. Isenberg and H.J. Shadomy, Lennette, Manual of Clinical Microbiology. 5th ed. 1991 Washington D.C. American society for Microbiology.
  2. Mac Faddin, Jean F., 1985 Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol.1. Baltimore, MD.: Williams & Wilkins.
  3. Victor, R., F. Lachica, S.S. Jang, and P.D. Hoeprich Thermonuclease Seroinhibition Test for Distinguishing Staphylococcus aureus from other Coagulase-positive Staphylococci. 1979. J. Clin. Microbiol. 9:141-143.
  4. Zarzour, J.Y., and E.A. Belle. Evaluation of three Test Procedures for Identification of Staphylococcus aureus from Clinical Sources. 1978. J. Clin. Microbiol. 7:133-136.


NUMÉRO DU CATALOGUE 

Milieu préparé    
Pétri, 100x15 mm 10/pqt 1669