B.H.I.A. (BRAIN HEART INFUSION AGAR) AVEC 10% SANG DE MOUTON CHLORAMPHÉNICOL, CYCLOHEXIMIDE ET GENTAMYCINE

Fiche technique #1031 / 2010.07.12

La gélose B.H.I.A. avec 10% sang de mouton, chloramphénicol, cycloheximide et gentamycine est un milieu solide et sélectif, utilisé pour la croissance et l'isolement des champignons pathogènes provenant de spécimens particulièrement contaminés par des bactéries et des champignons non pathogènes. Les antibiotiques ajoutés inhibent les bactéries et certaines levures.

FORMULE

en grammes par litre d'eau purifiée filtrée 

Infusion cervelle coeur

10,0
Peptone de caséine

8,5
Peptone de viande

8,5
Chlorure de Sodium

5,0
Dextrose

2,5
Phosphate disodique

2,5
Gélose

15,0
Sang de mouton défibriné

100 ml
Antibiotiques

 
Chloramphénicol

0,016
Gentamycine

0,005
Cycloheximide

0,5

pH 7.4 +/- 0,2 à 25º C

Cette formule approximative peut être ajustée et/ou enrichie pour des résultats optimaux.


PRÉCAUTIONS

Ce milieu est pour usage  diagnostique IN VITRO exclusivement.


CONSERVATION

Entreposer le milieu déshydraté dans un contenant hermétiquement fermé, dans un endroit sec entre 2–25º C. Garder le milieu préparé  à l'abri de la lumière, entre 2–8º C.


DÉTÉRIORATION

Ne pas utiliser un milieu déshydraté pris en masse ou croûté. Rejeter un milieu préparé présentant des signes de contamination ou de déshydratation. Ne  pas  utiliser  un milieu, dont la date de péremption est dépassée.


PRÉPARATIONS

Verser 52 g de milieu déshydraté  dans 900 ml d'eau  purifiée  filtrée.  Chauffer en agitant fréquemment et laisser bouillir  une minute. Stériliser à 121º C pendant 15 minutes. Refroidir à 45–50º C et aseptiquement, ajouter 100 ml de sang de mouton défibriné (4147), 10 ml de chloramphénicol (8629), 10 ml de gentamycine (8639) et 25 ml de cycloheximide (8724). Mélanger délicatement et distribuer en plats de Pétri ou en bouteilles stériles.


TECHNIQUE

Amener le milieu préparé à la  température de la pièce avant d'ensemencer.

1)     Ensemencer l'échantillon  directement et par épuisement.   Presser les  spécimens cutanés légèrement dans la gélose.  Sceller les boîtes de Pétri avec du ruban–cache.

2)     Incuber à 25º C pendant 4–6  semaines. Les bouteilles  sont   incubées les bouchons dévissés.

3)     Examiner à chaque  semaine  et noter la croissance.


CONTRÔLE DE QUALITÉ 
Resultats après 7 jours à 25ºC

Organismes

ATCC

Croissance
Candida albicans

10213

+
Candida albicans

60193

+
Trichophyton mentagrophytes

9533

+
Candida krusei

14243

-
Escherichia coli

25922

- ou partielle

LIMITES DE LA MÉTRODE

Ce milieu permet une identification partielle. D'autres tests peuvent être requis.


RÉFÉRENCES

  1. Ajello, J., L.K. Georg, W. Kaplan, L. Kaufman. 1963 CDC Laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994. US Govt. Printing Office, Washington. D.C.
  2. Finegold, S.M., E.J. Baron 1986 Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology 7th ed. C.V. Mosby, St. Louis
  3. Lennette, E.H., Ballows, A., Hausler, W.J.Jr., and Shadomy, H.J. Manual of Clinical Microbiology. 4th ed. 1985 Washington D.C.: American Society for Microbiology.
  4. Mac Faddin, Jean. F., 1985 Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol. 1. Baltimore, MD.: Williams & Wilkins.


NUMÉROS DU CATALOGUE

Milieu déshydraté 500 g QB-39-0206
     
Milieu préparé    
Pétri, 100x15 mm 10/pqt 1031
Bouteilles, 2 oz 20/pqt 5042
     
Sang de mouton défibriné 100 ml 4147
     
Antibiotiques    
Chloramphénicol, 10 ml 10/pqt 8629
Gentamycine, 10 ml 10/pqt 8639
Cycloheximide, 5 ml 10/pqt 8724