B.H.I.A. (BRAIN HEART INFUSION AGAR) AVEC 10% SANG DE MOUTON CHLORAMPHÉNICOL ET GENTAMYCINE

Fiche technique #1032 / 2010.07.12

La gélose B.H.I.A. avec 10% sang de mouton, chloramphénicol et gentamycine est un milieu solide et sélectif, utilisé pour la croissance et l'isolement des champignons pathogènes provenant de spécimens contaminés par des bactéries et des champignons non pathogènes. Le chloramphénicol et la gentamycine inhibent les bactéries gram positif et gram négatif.

 

FORMULE

en grammes par litre d'eau purifiée filtrée

Infusion cervelle coeur

10,0
Peptone de caséine

8,5
Peptone de viande

8,5
Chlorure de Sodium

5,0
Dextrose

2,5
Phosphate disodique

2,5
Gélose

15,0
Sabg de mouton défibriné

100 ml
Antibiotiques

 
Chloramphénicol

0,016
Gentamycine

0,005

pH 7,4 +/- 0,2 à 25º C

Cette formule approximative peut être ajustée et/ou enrichie pour  des résultats optimaux.

PRECAUTIONS

Ce milieu est pour usage  diagnostique IN VITRO exclusivement.

CONSERVATION

Entreposer le milieu déshydraté dans un contenant hermétiquement fermé, dans un endroit sec entre 2–25º C.   Garder le milieu préparé  à l'abri de la lumière, entre 2–8º C.

DÉTÉRIORATION

Ne pas utiliser un milieu déshydraté pris en masse ou croûté. Rejeter un milieu préparé présentant des signes de contamination ou de déshydratation. Ne  pas  utiliser  un milieu, dont la date de péremption est dépassée.


PRÉPARATION

Verser 52 g de milieu déshydraté  dans 900 ml d'eau  purifiée  filtrée.  Chauffer en agitant fréquemment et laisser bouillir  une minute. Stériliser à 121º C pendant 15 minutes. Refroidir à 45–50º C et aseptiquement, ajouter 100 ml de sang de mouton défibriné (4147), 10 ml de chloramphénicol (8629) et 10 ml  de gentamycine (8639). Mélanger  délicatement et distribuer dans des plats de Petri ou des tubes à culture stériles.


TECHNIQUES

Amener le milieu préparé à la  température de la pièce avant d'ensemencer.

1)     Ensemencer l'échantillon  directement et par épuisement.   Presser les  spécimens cutanés légèrement dans la gélose.  Sceller les boîtes de Pétri avec du ruban–cache.

2)     Incuber à 25º C pendant 4–6  semaines. Les bouteilles  sont   incubées les bouchons dévissés.

3)     Examiner à chaque  semaine  et noter la croissance.


CONTRÔLE DE QUALITÉ 
Resultats après 7 jours à 25ºC

Organismes

ATCC

Croissance
Candida albicans

10213

+
Candida albicans

60193

+
Trichophyton mentagrophytes

9533

+
Escherichia coli

25922

- ou partielle

LIMITES DE LA MÉTHODE

Ce milieu permet une identification partielle. D'autres tests peuvent être requis.


RÉFÉRENCES

  1. Ajello, J., L.K. Georg, W. Kaplan, L. Kaufman. 1963 CDC Laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994. US Govt. Printing Office, Washington. D.C.
  2. Finegold, S.M., E.J. Baron 1986 Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology 7th ed. C.V. Mosby, St. Louis
  3. Lennette, E.H., Ballows, A., Hausler, W.J.Jr., and Shadomy, H.J Manual of Clinical Microbiology. 4th ed. 1985 Washington D.C.:American Society for Microbiology.
  4. Mac Faddin, Jean. F., 1985 Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol. 1. Baltimore, MD.: Williams & Wilkins.


NUMÉROS DU CATALOGUE

Milieu déshydraté 500 g QB-39-0206
     
Milieu préparé    
Pétri, 100x15 mm 10/pqt 1032
     
     
Sang de mouton défibriné, 100 ml   4147
     
Antibiotiques    
chloramphénicol, 10 ml 10/pqt 8629
gentamycine, 10 ml 10/pqt 8639